免疫荧光

1. 细胞爬片¶

把爬片放入24孔板里。
将细胞传代入装有爬片的24孔板里（密度自己控制）。
细胞长好后做处理（例如加药等）。

2. 洗片¶

处理好后弃去培养基，用PBS洗三次（每次30秒，静置即可）。

3. 固定¶

加入4%的多聚甲醛（需用PBS提前配好），固定10分钟。
弃去多聚甲醛，用PBS洗3次。

4. 通透¶

自制一个湿盒：里面放滤纸，用封口膜等封边，并加入少量水以保持湿度。
夹出爬片，放入自制湿盒中。
加入0.2% Triton X-100（用PBS配置），室温孵育10分钟。
- 母液配制：先配制10% Triton母液。
- 工作液配制：取 20µL 10% Triton母液 加入 980µL PBS，混匀即为0.2% Triton工作液。
- 弃去Triton，用PBS洗3次。

5. 封闭¶

使用5%的羊血清进行封闭。
- 配制方法：60µL羊血清 + 1140µL PBS。
在37℃孵育1小时（注意防止蒸发），或在室温下孵育1-2小时。

6. 孵育一抗¶

弃去封闭液（无需清洗），直接加入已用羊血清稀释好的一抗。
在4℃条件下孵育过夜。
- 一抗稀释比例：1:200（例如：6µL抗体 + 1196µL羊血清）。

7. 孵育二抗¶

回收一抗。
用PBS洗3次。
加入二抗，在室温条件下避光孵育1-2小时。
- 二抗稀释比例：1:200 ~ 1:500。

8. 封片¶

回收二抗。
用PBS洗3次。
在载玻片上滴加3µL DAPI，然后将爬片倒扣在载玻片上。
用指甲油涂抹在爬片边缘以固定，然后在4℃条件下润湿过夜。

9. 共聚焦观察¶

将制备好的切片在共聚焦显微镜下进行观察。