组织DNA提取
耳样 DNA提取(蓝色字体用的是剪好的1ml枪头、红色字体用的是未剪的1ml枪头、黄色字体是100ul的枪头,每进行一步记得提前编好号)
试样DNA提取步骤如下:
1) 向样品加入0.5mL细胞裂解液,将样品剪碎后再加入0.5ml的细胞裂解液,然后加入30ul蛋白酶K (5.10) 溶液,混匀,56 C消化6 h~10 h至无明显组织块(一般需要过夜消化)
2) 准备好实验器材:饱和酚、氯仿:异戊醇(24:1),计时器、1ml的枪头、100ul的枪头、剪好的1ml的枪头、2ml的离心管和1.5ml的离心管、1ml的枪、100ul的枪、板子、报纸、记号笔、无菌水、废液缸
3) 将消化好的样品震荡混匀,离心
4) 离心机提前预冷到4°,向样品中加入加入1ml的苯酚,缓慢颠倒混匀10 min, 4 °,配平、12 000 r/min 离心10 min,取上清液移至新的2 mL 离心管中:
5) 加入500ul的苯酚和500ul的氯仿:异戊醇(24:1) ,缓慢颠倒混匀10 min, 4°,配平、12 000 r/min离心10 min;取上清液移至新的2 mL 离心管中
6) 加入1ml的氯仿:异戊醇(24:1) (5. 12),缓慢颠倒混匀10 min, 4 °,配平、12 000 r/min离心10 min;取上清液移至新的1.5mL离心管中;
7) 准备冰、无水乙醇(最左边躺着的冰箱里),将无水乙醇置于冰上,75%的酒精
8) 加入1ml -20 C预冷的无水乙醇,轻轻摇晃至絮状沉淀析出,将沉淀用枪头吸出到新的1.5的离心管中,没有沉淀的离心
9) 洗涤DNA:向沉淀中加入75%的酒精,并反复吹打几下,12 000 r/min离心5 min,将里面的液体倒掉,然后再将残存的液体吸出(注意不要吸出DNA)
10) 离心的DNA会有沉淀析出,重复(8)、(9)即可
11) 将提取的DNA放入超净台上,打开吹风,晾干
12) 待其中无水分过后加入30-50的无菌水即可