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组织RNA提取

组织RNA提取

  • 取新鲜组织,剪碎,30mg,放入1.5ml的EP管,放冰上。
  • 加入1ml的Trizol。混匀
  • 加磁珠,70HZ,震荡2min。然后室温放置5分钟。

    震荡盘在冰箱制冷(-20摄氏度) - 每1ml的Trizol,加入200微升的氯仿,涡旋充分,离心,静置3分钟 - 12000转,4摄氏度,离心10分钟。

    离心后会分为3层,下层游记苯酚氯仿层,中间层,上层是无色水样。RNA在水样层中。 - 吸取上层无色的水相500微升

  • 加入等体积的异丙醇。颠倒混匀。静置10分钟。

  • 4摄氏度,12000转,离心10分钟,去掉上清

  • 此时RNA在底部,为胶状沉淀

  • 加入75%的乙醇洗涤,使得RNA轻轻悬浮,用枪头抽干水分,再次加入清洗。

  • 用枪头抽干肉眼可见的水分。室温放置2-3分钟。加入100微升的无酶水。

  • 涡旋混匀

  • 选择rna模式进行测浓度

  • 反转录体系

    • 1000ng的RNA模版
    • 4XABscript 5微升
    • 20XgDNA 1微升
    • 补无酶水到达20微升
    • 反应参数
      • 每次都对应说明书看反应程序
      • 最后加180微升的无酶水